Descripción del prompt

2.2 Dilucidar los mecanismos moleculares clave de la acción de la polifilina III en diferentes subtipos de células de cáncer de mama. ① Basándose en resultados previos de diferencias de sensibilidad, seleccionar cuatro líneas celulares: MCF-7 (Luminal A), BT-474 (Luminal B), SK-BR-3 (enriquecido en HER2) y MDA-MB-231 (TNBC). Utilizar la tecnología de RNA-seq para comparar sistemáticamente los cambios del transcriptoma de cada subtipo antes y después del tratamiento con polifilina III. Centrarse en el enriquecimiento de la apoptosis, el estrés oxidativo y las vías de señalización específicas del subtipo (como ER, HER2, STAT3), y seleccionar los genes clave expresados diferencialmente. Combinar Western blotting y qRT-PCR para verificar los cambios de expresión de los objetivos candidatos (como los miembros de la familia Bcl-2, NOXA, PUMA, EGFR, p-STAT3, etc.), e identificar las moléculas efectoras centrales con la respuesta más significativa en cada subtipo. ② Realizar experimentos de intervención funcional dirigidos a los mecanismos dominantes de cada subtipo: En TNBC, establecer un grupo de control, un grupo de polifilina III, un grupo de NAC (eliminador de ROS) y un grupo de polifilina III + NAC para detectar la apoptosis (Caspasa-3/PARP clivada), los niveles de ROS, el potencial de membrana mitocondrial y el estado de fosforilación de JNK/p38. En células HER2⁺, establecer un grupo de control, un grupo de polifilina III y un grupo de sobreexpresión/silenciamiento de HER2 para evaluar la actividad de la vía HER2-AKT/ERK y la tasa de supervivencia celular. En células Luminal A, combinar inhibidores de ER (fulvestrant) o siRNA de ERα para observar si se revierte la resistencia a los fármacos. Al mismo tiempo, evaluar los cambios fenotípicos funcionales a través de citometría de flujo Annexin V/PI, análisis del ciclo celular y experimentos de scratch/Transwell. ③ Construir líneas celulares de knockout o sobreexpresión estables de genes de nodos clave (como HIF-1α, STAT3 o HER2) para verificar su necesidad en la muerte celular inducida por polifilina III, la inhibición de la señal y los cambios fenotípicos, y detectar la ubiquitinación de proteínas relacionadas o los cambios de localización subcelular, estableciendo así el eje del mecanismo molecular central que impulsa las diferencias de eficacia del fármaco en cada subtipo.