Prompt-Beschreibung

Erstelle eine technische Roadmap, die die experimentellen Beschreibungen zur besseren Übersichtlichkeit vereinfacht und organisiert. Das Thema ist die Untersuchung des Downregulationsmechanismus von 14-3-3β im hypoxischen Stress von Ösophaguskarzinomzellen (ESCC) und dessen Rolle bei der Förderung der ESCC-Progression. 1. Bestätige die Beziehung zwischen HIF1A und 14-3-3β. Zugehörige Experimente umfassen Veränderungen von HIF1A und 14-3-3β unter verschiedenen COCL2-Konzentrationen und Induktionszeiten, Veränderungen der 14-3-3β mRNA-Spiegel nach Induktion und Veränderungen von 14-3-3β nach HIF1A-Knockdown und Zugabe des HIF1A-Inhibitors PX-478. 2. Phänotypische Validierung von 14-3-3β in ESCC-Zellen, einschließlich MTT-Assays, qPCR und Koloniebildungsassays. 3. Untersuche die Beziehung zwischen 14-3-3β und Mitochondrien, einschließlich Veränderungen in der ROS-Detektion, den Autophagie-Spiegeln, dem mitochondrialen Membranpotential und den ATP-Spiegeln. 4. Untersuche die Beziehung zwischen 14-3-3β und ETFA, einschließlich Co-IP, mitochondrialer Isolation, nukleozytoplasmatischer Trennung und Co-IP von mitochondrialen und zytoplasmatischen Proteinen. 5. Erkläre den Wirkmechanismus von 14-3-3β und ETFA und deren Auswirkungen auf die Mitochondrienfunktion, einschließlich Veränderungen der ETFA-Protein- und mRNA-Spiegel nach 14-3-3β-Knockdown, Veränderungen der zytoplasmatischen ETFA-Spiegel, des mitochondrialen Sauerstoffverbrauchs, Veränderungen der β-Fettsäuren und Veränderungen der Ferroptose-bezogenen Indikatoren. 6. In-vivo-Experimente: CDX und Inhibitorinduktion, Veränderungen des Tumorvolumens, IHC und Gewebe-Microarray.