Prompt-Beschreibung

Das konstruierte rekombinante Plasmid wird in E. coli Wirtsstämme eingebracht. Häufig verwendete Wirtsstämme wie BL21(DE3) oder DH5α werden verwendet, und das rekombinante Plasmid wird durch Hitzeschock oder Elektroporation in die Bakterienzellen eingebracht. Nachdem das Plasmid in die Zellen gelangt ist, wird die Bakterienlösung kultiviert und resistente Kolonien werden selektiert, um die erfolgreiche Transformation zu bestätigen. Anschließend wird der rekombinante Stamm in großem Maßstab in einem Nährmedium kultiviert. Während der Expressionsphase wird ein Induktor hinzugefügt, um die Proteinexpression zu initiieren. Beispielsweise kann das häufig verwendete IPTG die effiziente Expression von Genen mit dem T7-Promotor induzieren; frühe Produktionsmethoden verwendeten auch den Tryptophan-Promotor (trp-Promotor), der den Insulinvorläufer nach Tryptophanverarmung automatisch exprimiert. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass durch Optimierung der Expressionsbedingungen und der Nährmediumzusammensetzung hohe Mengen an Insulin A-Kette und B-Kette (oder Vorläuferprotein) in E. coli erhalten werden können.