Prompt-Beschreibung

Positive Transformanten, die erfolgreich mit dem CRISPR-Editierungsvektor integriert wurden, werden schnell und zerstörungsfrei visuell über DsRed2-Rotfluoreszenz gescreent. Anschließend wird eine PCR an T0-Pflanzen mit den Primern 35S_F und Dm1_Cas9_304_R durchgeführt. Prinzip und Quelle: 35S_F: Zielt auf den Blumenkohlmosaikvirus 35S-Promotor ab. Dieser Promotor steuert die Expression des SpCas9-Gens und selektierbarer Marker-Gene (wie NPTII, Hygromycin-Phosphotransferase) auf dem CRISPR-Vektor. Dm1_Cas9_304_R: Zielt auf eine spezifische Sequenz innerhalb des SpCas9-Gens ab. Funktion: Das Amplifikationsprodukt dieser Primer liefert einen direkten Beweis für die erfolgreiche Integration der T-DNA-Region in das Pflanzengenom. Ein positives Ergebnis deutet darauf hin, dass die Pflanze ein echter Transformant ist und kein falsch-positives Ergebnis, das der Resistenzselektion entgangen ist.