1. Kernszenen-Darstellung Erstelle ein schematisches Diagramm im Querformat im Stil einer wissenschaftlichen Vektorillustration, das das Funktionsprinzip eines modularen CRISPR-Cas9-Gen-Editierungssystems für Pflanzen klar darstellt. 2. Detaillierte Szenenbeschreibung (nach Modul) Modul 1: Plasmidvektor (pDV003 - Links) Zeichne ein großes kreisförmiges Plasmid. Beschrifte das "Pol II Promotor (CmYLCV)"-Modul auf dem Ring und lasse eine lange horizontale RNA-Kette (polyzistronisches Transkript) davon ausgehen. Hebe auf der RNA-Kette zwei Zielsequenzen in leuchtendem Rot und leuchtendem Orange hervor, die als "gRNA: G5" bzw. "gRNA: G4.2" beschriftet sind. Jede Zielsequenz wird von eindeutigen Spaltungsmarkern (wie Rauten oder Schlüssellöchern) flankiert, die "Csy4-Erkennungsstellen" darstellen. Zeichne unterhalb des Plasmidrings eine separate "Reportergen-Expressionskassette", die die Icons "FMV34S-Promotor" und "Chloroplasten-gerichtetes mCherry" enthält. Beschrifte den Bereich "AarI-Schnittstelle & ccdB-Negativselektionsgen" am unteren Rand des Plasmids. Modul 2: Csy4-Prozessierung und gRNA-Maturation (Mitte) Zeichne neben die RNA-Kette ein blaues oder grünes "molekulare Schere"-förmiges Protein, das als "Csy4-Ribonuklease" beschriftet ist. Zeige deutlich, wie Csy4 an den beiden Erkennungsstellen schneidet und die lange RNA-Kette präzise spaltet, um zwei unabhängige, vollständige einzelsträngige gRNAs freizusetzen. Modul 3: sgRNA-Strukturoptimierung Nahaufnahme (Mitte - Lupenrahmen) Füge einen Lupen-artigen Nahaufnahmerahmen zu einer der freigesetzten gRNAs hinzu. Vergleiche im Inneren des Rahmens Seite an Seite: Links (Standard): Eine einfache kurze Stamm-Schleifen-Struktur mit dem Hinweis "Standard sgRNA" und der Sequenz "TTTT". Rechts (Optimiert): Eine Struktur mit einer deutlich längeren Stamm-Schleife mit dem Hinweis "Optimierte sgRNA (Dang et al.)". Kennzeichne "Doppelstrangbereich-Erweiterung (+5 bp)" und "Schlüsselmutation (T→C)" mit Pfeilen und Text. Modul 4: Cas9-Komplex und Gen-Editierung (Rechts) Zeichne ein klares Strukturmodell des SpCas9-Proteins (Multi-Domänen-Anordnung). Zeige eine optimierte gRNA, die an Cas9 bindet, um einen "Cas9/gRNA-Ribonukleoprotein-Komplex (RNP)" zu bilden. Zeichne zwei parallele blaue genomische DNA-Doppelhelices, die mit den Zielpunkten "Genomischer Locus G5" und "Genomischer Locus G4.2" beschriftet sind. Zeige, wie der Cas9-Komplex an das DNA-Ziel bindet und einen "DNA-Doppelstrangbruch (DSB)" stromaufwärts der PAM-Sequenz erzeugt (angezeigt durch einen Bruch oder ein Blitzsymbol). 3. Stil und visuelle Anforderungen Gesamtstil: Einfache, semi-realistische wissenschaftliche Vektorillustration mit klaren Linien und präziser Struktur. Farbschema: Verwende Farbschemata für akademische Zeitschriften. Es wird empfohlen, Blau für DNA und RNA zu verwenden.
1. DNA aus Blättern extrahieren. 2. PCR an T0-Pflanzen mit d...