Prompt-Beschreibung

2.2 Erläutern Sie die wichtigsten molekularen Mechanismen der Wirkung von Polyphyllin III auf verschiedene Subtypen von Brustkrebszellen. ① Wählen Sie basierend auf früheren Ergebnissen zu Sensitivitätsunterschieden vier Zelllinien aus: MCF-7 (Luminal A), BT-474 (Luminal B), SK-BR-3 (HER2-angereichert) und MDA-MB-231 (TNBC). Verwenden Sie die RNA-seq-Technologie, um die Transkriptomveränderungen jedes Subtyps vor und nach der Behandlung mit Polyphyllin III systematisch zu vergleichen. Konzentrieren Sie sich auf die Anreicherung von Apoptose, oxidativem Stress und subtypspezifischen Signalwegen (wie ER, HER2, STAT3) und screenen Sie nach wichtigen differentiell exprimierten Genen. Kombinieren Sie Western Blotting und qRT-PCR, um die Expressionsänderungen von Kandidatenzielen (wie Bcl-2-Familienmitglieder, NOXA, PUMA, EGFR, p-STAT3 usw.) zu verifizieren und die Kerneffektormoleküle mit der signifikantesten Reaktion in jedem Subtyp zu identifizieren. ② Führen Sie funktionelle Interventionsversuche durch, die auf die dominanten Mechanismen jedes Subtyps abzielen: Richten Sie in TNBC eine Kontrollgruppe, eine Polyphyllin III-Gruppe, eine NAC (ROS-Fänger)-Gruppe und eine Polyphyllin III + NAC-Gruppe ein, um Apoptose (Cleaved Caspase-3/PARP), ROS-Spiegel, mitochondriales Membranpotential und JNK/p38-Phosphorylierungsstatus zu detektieren. Richten Sie in HER2⁺-Zellen eine Kontrollgruppe, eine Polyphyllin III-Gruppe und eine HER2-Überexpressions-/Knockdown-Gruppe ein, um die HER2-AKT/ERK-Signalwegaktivität und die Zellüberlebensrate zu bewerten. Kombinieren Sie in Luminal A-Zellen ER-Inhibitoren (Fulvestrant) oder ERα-siRNA, um zu beobachten, ob die Arzneimittelresistenz umgekehrt wird. Bewerten Sie gleichzeitig funktionelle phänotypische Veränderungen durch Annexin V/PI-Durchflusszytometrie, Zellzyklusanalyse und Scratch-/Transwell-Experimente. ③ Erstellen Sie stabile Knockout- oder Überexpressionszelllinien von Schlüsselknotengenen (wie HIF-1α, STAT3 oder HER2), um deren Notwendigkeit bei der durch Polyphyllin III induzierten Zelltod, Signalhemmung und phänotypischen Veränderungen zu verifizieren, und detektieren Sie verwandte Protein-Ubiquitinierung oder subzelluläre Lokalisationsänderungen, um so die zentrale molekulare Mechanismusachse zu etablieren, die die Unterschiede in der Arzneimittelwirksamkeit in jedem Subtyp antreibt.